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本制品是用于电泳分离蛋白质-核酸复合体的电泳试剂盒。凝胶迁移实验（EMSA）实验时，需要先将标记的DNA与蛋白质共孵育，随后进行PAGE电泳，电泳后将复合物转移至膜并进行检测，本制品就是用于电泳步骤的试剂盒。

• 本制品即开即用，操作简单便捷。
  
• 能最大限度地维持蛋白质-DNA复合体的稳定性。
  
• 足够30次EMSA迷你电泳实验。
  
• 跟地高辛、生物素和其他标记的DNA探针兼容。
  
• 后续可以用于碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶检测兼容。

• PAGE浓度的选择：根据EMSA所用DNA探针的长度选择PAGE凝胶的浓度。5%的PAGE的有效分辨范围为80～500bp、8%的PAGE的有效分辨范围为60～400bp、12%的PAGE的有效分辨范围为40～200bp。
  
• 用自选方法标记DNA探针、制备细胞裂解液和进行DNA探针与目标蛋白的结合，获得含有靶蛋白质-DNA复合体的结合液。一定要做阴性对照（就是用不含靶蛋白质与标记的DNA探针结合）。
  
• 体积的选择：EMSA实验一般使用长度为8-10cm的迷你胶，可以结合梳子的厚度，计算所需PAGE胶的体积。
  
• 配制PAGE胶：
  
  下面以配制100mL PAGE胶为例计算用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加。一般一块10×10cm的胶只需要10mL左右的PAGE胶。
  
  
  • 新鲜配制10%的APS：称量约0.1克硫酸铵干粉到一个1.5mL EP管中，按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL自备去离子水的比例将水加到管中，摇晃到硫酸铵粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周，超过一周的不能再用。
    
  • 新鲜配制30% AB溶液(29:1)：将2g甲叉双丙烯酰胺倒入到装有60g丙烯酰胺的250mL棕色塑料瓶中，天平上去皮，加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解（约需10～20分钟）。此溶液即为丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液，简称为30% AB溶液，此溶液4℃保存，最好在一个月内用完。
    
  • 配PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液和10×EMSA电泳液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
    

    PAGE胶浓度	各成分用量（单位：mL）			总体积（mL）
    	去离子水	30% AB溶液	10×EMSA电泳液
    5%	73.4	16.6	10.0	100
    6%	70.0	20.0	10.0	100
    7%	66.7	23.3	10.0	100
    8%	63.3	26.7	10.0	100
    9%	60.0	30.0	10.0	100
    10%	56.7	33.3	10.0	100
    11%	53.3	36.7	10.0	100
    12%	50.0	40.0.	10.0	100

  • 摇晃混匀。最好能抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应），无条件也可以不脱氧。
    
  • 加入500μL 10% APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
    
  • 在PAGE胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
    
  • 室温聚合30～60分钟（低温抑制聚合反应，故最好室温）。
    
  • 待PAGE胶凝固后拔出梳子，用1×EMSA电泳液冲洗加样孔。1×EMSA电泳液可以用9倍的去离子水和1倍的10×EMSA电泳液混合均匀而得（下同）。
    
  • 放4℃冰箱预冷30分钟～12小时。为了防止PAGE胶收缩，最好在胶的顶部加少量1×EMSA电泳液。使用预冷的PAGE胶有利于蛋白质-DNA复合体在电泳时保持结合状态，因为此复合体为非共价结合，温度越高，这些微弱相互作用越不稳定。
• 将预冷后的PAGE凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×EMSA电泳液。
  
• 取10μL自备的蛋白质-DNA结合样品，加入等体积的2×蛋白DNA复合物EMSA上样液，轻柔混合均匀后上样。
  
• 连接电源线，打开电源开关。使用8W的功率，电泳16～18小时。由于温度变化过大会改变蛋白-DNA复合体构型，所以电泳时最好能保持4℃恒温。
  
• 终止电泳，取出凝胶进行后续的转膜和显色处理。